萊克多巴胺快速檢測試劑盒說明書-上海研謹生物科技有限公司

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萊克多巴胺快速檢測試劑盒說明書

點擊次數(shù)：1892 更新時間：2019-02-14

萊克多巴胺

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物萊克多巴胺將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗萊克多巴胺抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物萊克多巴胺的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物萊克多巴胺的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.05ppb
孵育溫度： 25℃
孵育時間： 30min～15min
樣本檢測下限

組織 ······································· 0.2ppb

尿樣 ······································· 0.1ppb

交叉反應(yīng)率

萊克多巴胺（Ractopamine） ···················· 100%

多巴酚丁胺（dobutamine） ····················· < 1%

沙丁胺醇（Salbutamol ） ························ <0.1%

克倫特羅（Clenbuterol）························· <0.1%

樣本回收率

組織、尿樣 ···························· 60%~120%

三、試劑盒組成

1	微量測試孔	每條8孔，一板12條
2	標準液×6瓶（1ml/瓶）	0ppb	0.05ppb
		0.15ppb	0.45ppb
		1.35ppb	4.05ppb
3	酶標記物	7ml	紅色帽
4	抗體工作液	7ml	藍色帽
5	底物A液	7ml	白色帽
6	底物B液	7ml	黑色帽
7	終止液	7ml	黃色帽
8	20X濃縮洗滌液	15ml	白色帽
9	2X濃縮提取液	50ml X 2	透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、恒溫箱、打印機

微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl、多道30～300 µl

試劑：氫氧化鈉、濃鹽酸

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

樣本前處理需配制：

配液1 0.2M 鹽酸

取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。

配液2 1M 氫氧化鈉

稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至

100ml。

配液3 樣本提取液

2X濃縮提取液用去離子水1：1稀釋。

樣本處理：

（a）組織樣本的處理方法

稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于50ml離心管中，加入3ml 0.2M鹽酸（見配液1），充分振蕩3min。
再加入600ul 1M 氫氧化鈉（見配液2）溶液和2.4ml 樣本提取液（見配液3）溶液，充分振蕩3min，室溫4000r/min 以上離心10min。
取50 µl上層液體用于分析。（注：離心后若有脂肪層，去除脂肪層或撥開脂肪層，取清澈液體進行分析）。

樣本稀釋倍數(shù)： 4倍

注：此方法可與克倫特羅，沙丁胺醇處理方法通用。

（b）尿樣樣本的處理方法

取50µl清亮尿樣直接測定（如果尿樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。

樣本稀釋倍數(shù): 1倍

六、 酶標免疫分析程序:

測定前應(yīng)須知：

使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
配液：洗滌液配制

將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水

按照1:19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子

水），或按所需用量配制洗滌液。

編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液250µl/孔洗板4～5次，每次間隔15-～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
測定：加入終止液50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，5min內(nèi)讀數(shù)），測定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺量成負相關(guān)。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816；0.15ppb為1.415；0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313；4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實際濃度。