質(zhì)粒小量快速提取試劑盒

Rapid Mini Plasmid Kit

產(chǎn)品信息：

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 18 個月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高

鹽、低pH 值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒 DNA，再通過漂洗液將雜質(zhì)和

其它細菌成分去除，后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒 DNA 從硅

基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點：：

1. 離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極

小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

• 快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯+#仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、純度好， 可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測序等各種分子生物學實驗。

注意事項：

• 第--次使用時，將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 P1 后（終濃度 100ug/ml） 于 2-8℃保存。如果溶液 P1 中 RNase A 失活，提取的質(zhì)粒可能會有微量 RNA 殘留， 在溶液 P1 中補加 RNase A 即可。
• 環(huán)境溫度低時溶液 P2 中 SDS 可能會析出渾濁或者沉淀，可在 37℃水浴加熱幾分鐘， 即可恢復(fù)澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
• 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
• 本試劑盒適用菌株為 XL-1 Blue 和 DH5a 等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株為JM 系列、HB101 等 endA 菌株或野生型菌株，核酸酶含量豐富，應(yīng)購買本公司生產(chǎn)的高純度質(zhì)粒小量快速提取試劑盒。
• 溶液 P3 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。提取質(zhì)粒的量與細菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)?？截悢?shù)等因素有關(guān)。一般高拷貝質(zhì)粒，建議接種單菌落于 1.5-4.5ml 加合適抗生素的 LB 培養(yǎng)基，過夜培養(yǎng) 14-16 個小時，可提取出多達 20µg 的純凈質(zhì)粒。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)?；虼笥?/font> 10kb 的大質(zhì)粒，應(yīng)適當加大菌體使用量，使用 5-10ml 過夜培養(yǎng)物，同時按比例增加 P1、P2、P3 的用量，其它步驟相同。
• 得到的質(zhì)粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD₂₆₀ 值為 1 相當于大約 50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為 2 條或者多條 DNA 條帶，這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動位置不一造成，與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guān)。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過 90%。

7. 洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使

用水洗脫， 但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒

應(yīng)該保存在-20℃。質(zhì)粒DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫

（10mM Tris-HCl，1mM EDTA， pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，

使用時可以適當稀釋。

自備試劑：無水乙醇

操作步驟：

提示：

ð 第--次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指+#定量無水乙醇，充分混勻，加入

后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

ð 將 RNase A 全部加入溶液 P1 中，混勻，每次使用后置于 2-8℃保存。