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豬乙型腦炎病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：豬乙型腦炎病毒抗體( IgG )診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名稱：Porcine Japanese B Encephalitis Virus Antibody Test Kit (ELISA), JEV Ab
【規(guī)格】
96 T×2/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒用于定性測(cè)定豬血清中日本乙型腦炎病毒（又稱流行性乙型腦炎）IgG抗體。用于評(píng)估豬場(chǎng)豬乙型腦炎病毒疫苗免疫狀況，感染豬的血清學(xué)診斷以及豬乙型腦炎病毒的流行病學(xué)調(diào)查。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)( ELISA )原理，由包被有高純度的豬乙型腦炎抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的JEV-IgG結(jié)合，再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+JEV-IgG+酶標(biāo)抗豬IgG抗體"復(fù)合物，加入顯色劑，通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與JEV-IgG的量成正比，當(dāng)顯色超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽(yáng)性，表明免疫有效或有自然感染。
【主要組成成份】
1 | JEV抗原包被板 | 96 T×2 | |
2 | 酶標(biāo)記物 | 22 ml | 黃色帽 |
3 | 樣本稀釋液 | 50 ml | 透明帽 |
4 | JEV-IgG陰性對(duì)照血清 | 1.5 ml | 綠色帽 |
5 | JEV-IgG陽(yáng)性對(duì)照血清 | 1.5 ml | 紅色帽 |
6 | 顯色劑 | 12 ml×2 | 橙色帽 |
7 | 終止液 | 12 ml | 藍(lán)色帽 |
8 | 10×濃縮洗滌液 | 50 ml | 白色帽 |
9 | 蓋板膜 | 2張 | |
10 | 說明書 | 1份 | |
【自備器材】
1．酶標(biāo)儀（雙波長(zhǎng)450/630 nm濾光片）
2．微量移液器（單道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）
3．水浴箱或恒溫箱
4．微量振蕩器
5．一次性槍頭（10 μl，200 μl）
6．去離子水
【樣本要求】
1．本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清，樣本應(yīng)無(wú)菌采集，2 ℃－8 ℃貯存應(yīng)不超過一周，長(zhǎng)期應(yīng)在-20 ℃以下保存。
2．避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌的血清樣本。
【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】
1．試劑盒組分回溫平衡: 試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前，先取出置室溫30 min。酶標(biāo)板應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開。
2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋 （例：將5 μl樣本加至195 μl樣本稀釋液中）。
3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋10倍（例：將10 ml洗滌液加入90 ml去離子水中）。若10倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶，屬正常現(xiàn)象，放置37 ℃至溶解后即可。
【操作步驟】
1. 加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測(cè)時(shí)，設(shè)陰、陽(yáng)性對(duì)照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100 μl于相應(yīng)孔中（可不設(shè)空白對(duì)照）。其余為樣本孔，每孔加100 μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本。
2. 溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。
3. 洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應(yīng)板孔，靜置10 s，直接甩出，洗滌3次，最后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。
4. 加酶：每孔加酶標(biāo)記物100 μl。
5. 溫育：加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜，置37 ℃溫育30 min。
6. 洗板：同步驟3。
7. 顯色：每孔加顯色劑100 μl，振蕩混勻，37 ℃避光反應(yīng)10 min。
8. 終止：每孔加終止液50 μl，振蕩10 s，充分混勻，終止后即讀數(shù)。
9. 讀數(shù)：以450 nm/ 630 nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)，讀取各孔吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔的平均OD值≥0.60，陰性對(duì)照孔的平均OD值必須＜0.10；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定，S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:
S/P=(樣本OD450/630值－NCx)/（PCx－NCx)，其中NCx表示陰性對(duì)照孔平均OD450/630值（若小于0.05，則按照0.05計(jì)算），PCx表示陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD450/630值；
當(dāng)樣本的S/P≥0.25時(shí)判為陽(yáng)性；樣品S/P值＜0.25時(shí)判為陰性。
【注意事項(xiàng)】
1. 請(qǐng)?jiān)?/span>使用試劑盒之前，仔細(xì)閱讀說明書。
2. 請(qǐng)不要使用過期的試劑盒組分，不要將不同批次的組分混合使用。
3. 本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對(duì)待，試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121 ℃高壓蒸汽滅菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30 min后廢棄。
4. 未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2 ℃-8 ℃避光保存。
5. 應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性。
6. 加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。
7. 終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。
【儲(chǔ)存條件及有效期】
于2 ℃－8 ℃避光保存，防止冷凍，有效期12個(gè)月。
【生產(chǎn)日期及批號(hào)】
詳見包裝袋和外包裝盒。
僅供獸醫(yī)診斷使用
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