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馬鈴薯卷葉病毒5（PLRV5）ELISA試劑盒說明書 |
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馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于檢測植物組織，細胞上清及相關液體樣本中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)水平。 實驗原理： 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標本中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)。用純化的馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)相結合，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后再與HRP標記的馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)的存在與否。
試劑盒組成：
樣本處理及要求： 1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。 2. 血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。 3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。 4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。 5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。 6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融. 7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
結果判定： 試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10 臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)陰性 陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為馬鈴薯卷葉病毒5(PLRV5)陽性 注意事項 1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。 2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。 3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
5．底物請避光保存。 6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm 7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。
保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個月 |
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