植物木葡聚糖內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶/水解酶（XTH）ELISA檢測試劑盒說明書 |
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本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷 植物（Plant）木葡聚糖內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶/水解酶（XTH）ELISA檢測試劑盒使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被木葡聚糖內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶/水解酶（XTH）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的木葡聚糖內(nèi)糖基轉(zhuǎn)移酶/水解酶（XTH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品活性。 樣品收集、處理及保存方法 1. 樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。 2. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行。 3. 植物萃取液或其它相關(guān)樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。 4. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標(biāo)儀（450nm） 2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項(xiàng) 1. 試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。 2. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 3. 濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。 4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。 5. 所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成
注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、50、100、200、400、800 U/mL 試劑的準(zhǔn)備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步驟 1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL； 3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。 4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。 6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。 結(jié)果判斷 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
試劑盒性能 1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。 2. 靈敏度：最di檢測濃度小于10 U/mL。 3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。 4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。 5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 6. 有效期：6個(gè)月
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
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