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CCK-8試劑盒試驗(yàn)的兩種方法分享
在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，大家是不是總會(huì)好奇別人家的實(shí)驗(yàn)總是做的又快又好，而自己做的實(shí)驗(yàn)又慢又難得做出自己滿(mǎn)意的結(jié)果，搞得一天到晚也挺忙的，心想：我也很努力很認(rèn)真啊，為啥效率總提不起來(lái)呢？
其實(shí)，有時(shí)候并不是自己不努力，只是沒(méi)有找對(duì)方法。做實(shí)驗(yàn)可不能光是埋頭苦干，還要學(xué)會(huì)運(yùn)用合適的檢測(cè)試劑盒，這樣就能事半功倍。
如果你還在用MTT，那就真的OUT了，MTT花4小時(shí)才能得到的結(jié)果用CCK-8試劑盒只需1小時(shí)，CCK-8試劑盒可用于細(xì)胞增殖和毒性分析，同MTT法相比，CCK-8試劑盒即開(kāi)即用，檢測(cè)時(shí)間大概在1小時(shí)左右。
不僅如此，CCK-8試劑盒對(duì)細(xì)胞的毒性極小，*可以測(cè)完細(xì)胞增殖或藥物毒性后再繼續(xù)用細(xì)胞進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。下面小編就來(lái)為大家介紹一下CCK-8試劑盒的具體情況。
CCK-8試劑盒基本原理
基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2,4-二磺酸苯）-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓*（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進(jìn)行細(xì)胞增殖和毒性分析。
CCK-8試劑盒產(chǎn)品用途
主要用于藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)。
細(xì)胞毒性檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)對(duì)比
CCK-8試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法與步驟
☆實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞活性檢測(cè)
1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，96孔板每孔加入100μL，使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至（1,000~10,000）/孔。
2.5%CO2，37℃培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)（培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異）。
3.每孔加入10μLCCK-8試劑盒溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL，則需加入20μLCCK-8試劑盒溶液，其它情況以此類(lèi)推。
4.在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5~4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定（一般情況下，白細(xì)胞較難顯色，因此需要較長(zhǎng)的CCK-8試劑盒反應(yīng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難顯色。對(duì)于貼壁細(xì)胞，CCK-8試劑盒的培養(yǎng)時(shí)間一般為1~4小時(shí)，注意：CCK-8試劑盒的*反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的*時(shí)間為準(zhǔn)）。初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
5.在450nm測(cè)定吸光度。
☆實(shí)驗(yàn)二：細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)
1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，96孔板每孔加入100μL，使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至（1,000~10,000）/孔。
2.5%CO2，37℃培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)（培養(yǎng)時(shí)間根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異）。
3.加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)，將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如6、12、24或48小時(shí)）。
4.每孔加入10μLCCK-8試劑盒溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200μL，則需加入20μLCCK-8試劑盒溶液，其它情況以此類(lèi)推。
5.在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5~4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況孵育1小時(shí)就可以了。時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定（一般情況下，白細(xì)胞較難顯色，因此需要較長(zhǎng)的CCK-8試劑盒反應(yīng)時(shí)間或增加細(xì)胞數(shù)量。懸浮細(xì)胞與貼壁細(xì)胞相比較難顯色。對(duì)于貼壁細(xì)胞，CCK-8試劑盒的培養(yǎng)時(shí)間一般為1~4小時(shí)，注意：CCK-8試劑盒的*反應(yīng)時(shí)間以具體顯色的*時(shí)間為準(zhǔn)）。初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在0.5、1、2和4小時(shí)后分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
6.在450nm測(cè)定吸光度。
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